LAMP方法通過微波照射檢測瘧原蟲

圖片：Blockthermostat BT 200

微波照射是有前景的平臺，一套程序通過微波照射從人血和瘧原蟲體內快速可靠地提取核酸。

雖然血液涂片的顯微鏡檢仍被視為診斷瘧疾感染的金標準，但是顯微鏡檢常檢測不到低密度感染，且要求高度技巧。

德國蒂賓根大學的科學家與剛果共和國的同行合作收集了嚴重惡性瘧原蟲感染患者剛入住加蓬蘭巴雷內市阿爾伯特?施韋澤醫院時的靜脈血樣，或者裝進5毫升的肝素化試管，或者把指尖采的血保存在無菌沃特曼濾紙上。

基于凱杰公司(Hilden, Germany)的傳統QIAamp DNA迷你血液試劑盒從全血樣本以及寄生蟲培養物的系列稀釋液中提取DNA。使用定制的環介導恒溫擴增(LAMP)方法，它利用羥基萘酚藍(HNB)和嗜熱脂肪芽孢桿菌(Bst 2.0) DNA聚合酶在分子水平上檢測瘧原蟲。用兩個熱單元(Block Thermostat BT 200, Kleinfeld Labortechnik, Gehrden, Germany)執行LAMP測定反應，預熱到60 °C，進行45分鐘的DNA擴增，并在80 °C進行兩分鐘的酶滅活。

用微波照射進行DNA分離后，傳統的聚合酶鏈反應(PCR)測定最多能夠檢測五個瘧原蟲/微升。用微波照射進行DNA分離后，LAMP方法的檢測下限是一個惡性瘧原蟲。從核酸提取到最后的讀數顯示共經歷45分鐘。通過清楚的變色顯像擴增子，然后通過凝膠電泳確認。從紫色變成亮藍被認為陽性結果。如果反應一直是紫色，則判定樣本為陰性。

該研究的論文發表于2014年11月24日的《瘧疾雜志》(Malaria Journal)。作者總結說，LAMP過程為在分子水平上檢測瘧原蟲提供了一種便宜、簡單而快速的方法。基本實驗室很容易執行這項檢驗。該方法已經過確證，它專為資源貧乏場合使用而開發。這樣的快速分子診斷檢驗也許能幫助醫療工作者在瘧疾疫區及時實施干預治療。