用甲醇活化不能超過15秒，時間太久會對pvdf膜造成損傷。找一個平皿，倒入一定體積的純甲醇，用鑷子夾著膜邊角在純甲醇里漂一下，見到膜由不透明變為均一的半透明，大概需要5秒左右即可。然后立即向平皿中加入不含甲醇的轉膜液，使甲醇的終濃度在20％，將凝膠和膜以及濾紙在其中平衡30min左右即可轉膜，在整個過程中注意不要讓膜干了，如果膜干了就需要重新活化。注意操作中不要劃傷膜或者弄臟膜，否則顯色后會出現痕跡，干擾結果判定。膜的孔徑也是值得考慮的問題，普通大中分子量蛋白可選0.45um的就可以了,但對小分子量的多肽則需要0.22um的膜。尼龍膜和NC膜不需活化。