1. Reagents
(1) Affi-gel Protein-A Agarose (BioRad #153-6153)
(2) MAPS II Binding Buffer (BioRad # 153-6161)
(3) 0.314 g/ml diH2O
(4) MAPS II Elution Buffer (BioRad #153-6162)
(5) 0.023 g/ml diH2O
(6) MAPS II Regeneration Buffer (BioRad #153-6166
(7) 1M Tris, pH 9-11
(8) PBS
2. Procedure
(1) Dilute Ab 1:5 with Binding Buffer. Filter through a 0.22 m filter.
(2) Equilibrate column with at least 2 bed volumes of Binding Buffer
(3) Apply Sample.
Wash column with 5-6 bed volumes of Binding Buffer. Collect 1 ml fractions until base line is achieved.
Elute Ab with 5 bed volumes of Elution Buffer. Collect 1 ml fractions into 50 ml 1M Tris, until base line is achieved.
Take 50 ml aliquots of each fraction for ELISA.
Pool fractions containing Ab. Dialyze against 2 x 4L PBS, overnight, 2-8℃.
Re-equilibrate column with Binding Buffer. Store column at 2-8℃.
Determine protein concentration of Ab, aliquot, and store at -20℃.
3. Note
Extinction Coefficient for IgG = 1.4 and for IgM = 1.2
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