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  • 發布時間:2019-08-20 16:17 原文鏈接: QuickYeastDNAPrep:IsolationofTotalDNA(genomicandplasmid)

    • Grow a 5 ml YPD O/N culture inoculated with a single yeast colony at 30 deg.

    • Transfer culture to a small 13 x 100 glass tube. Spin down cells 2 min. in tabletop centrifuge. Pour off supernatant.

    • Wash cells with 5 ml H2O. Spin down cells 2 min. Pour off supernatant. Cell pellet can be stored at -20 deg.

    • Resuspend cells in 500 ul lysis buffer by vortexing.

      Lysis buffer:
      20 ml:
      0.1M Tris pH 8.0
      2 ml 1M Tris 8.0
      50 mM EDTA
      2 ml 0.5M EDTA
      1% SDS
      2 ml 10% SDS


      14 ml H2O



    • Add acid-washed glass beads (400-500 microns) to about 2 mm below meniscus. Vortex 30 sec. Add 25 ul 5M NaCl. Vortex 30 sec. Spin down 2 min. to decrease foam.

    • Remove lysed cells with P1000 at bottom of tube and transfer to a 1.5 ml microfuge tube.

    • Add 400 ul of TE-saturated phenol. Vortex. Spin 4 min. Transfer upper phase to a clean 1.5 ml microfuge tube (~400ul).

    • Add 400 ul phenol:chloroform (4:1). Vortex. Spin 4 min. Transfer upper phase to a clean 1.5 ml microfuge tube.

    • Add 1 ml 95% EtOH and mix. Spin 6 min. Pour off EtOH. Wash with 1 ml 70% EtOH. Vortex. Spin 6 min. Pour off EtOH. Dry pellet in hood or vacuum.

    • Resuspend in 50 ul TE (vortex, 37 deg. 10 min, vortex)


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