1、根據樣品數量，按50體積BCA試劑A加1體積BCA試劑B（50:1）配制適量BCA工作液，充分混勻。BCA工作液室溫24小時內穩定。2、完全溶解蛋白標準品，取10微升稀釋至100微升 ，使終濃度為0.5mg/ml。蛋白樣品在什么溶液中，標準品也宜用什么溶液稀釋。但是為了簡便起見，也可以用0.9%NaCl或PBS稀釋標準品。3、將標準品按0，1，2，4，8，12，16，20微升加到96孔板的標準品孔中，加標準品稀釋液補足到20微升。4、加適當體積樣品到96孔板的樣品空中，加標準品稀釋液到20微升。5、各孔加入200微升BCA工作液，37℃放置30分鐘。
溶液的濃度取決于溶解在溶劑內的物質的多少。溶解度則是溶劑在特定溫度下，可以溶解最多多少物質。