標準的PCR反應體系:10×擴增緩沖液
10ul
4種dNTP混合物
各200umol/L
引物
各10~100pmol
模板DNA
0.2ug
Taq
DNA聚合酶
2.5u
Mg2+
1.5mmol/L
加雙或三蒸水至
100ul
PCR反應五要素:參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR
產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度.理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增.設計引物應遵循以下原則:①引物長度:15-30bp,常用為20bp左右.②引物擴增跨度:以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段.③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶.ATGC最好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列.④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3’端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶.⑤引物3’端的堿基,特別是最末及倒數第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗.⑥引物中有或能加上合適的酶切位點,被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點,這對酶切分析或分子克隆很有好處.⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性
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波蘭生命科學公司ScopeFluidics近日表示,在收到交易的最后一筆款項后,該公司最近敲定了以1.3億美元(約合9.5億元人民幣)的價格將其子公司CuriosityDiagnostics出售給Bi......
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