高速逆流色譜的發展歷史與優勢

　　高速逆流色譜屬于逆流色譜的范疇，逆流色譜是一種新型的分離手段，它的主要分離原理是利用樣品在固定相和流動相之間的差異也就是分配比不同而進行分離的，值得注意的是逆流色譜的固定相和流動相都是液體，其主要優點是沒有傳統色譜的死吸附，樣品的回收率高等特點。

　　逆流色譜源于逆流分溶法，也就是用實驗室經常使用的分液漏斗進行連續的液液萃取，根據樣品在兩種互不相溶的溶劑中分配比不同而進行分離。

　　逆流色譜早期發展的方法有液滴逆流色譜，旋轉小室逆流色譜等。但是作為一種分離手段，早期發展的逆流色譜不能滿足高效快速的分離，分離的周期很長，效率很低。

　　在70年代，Ito 博士成功開發了一種能夠高效快速分離的逆流色譜----高速逆流色譜。但高速逆流色譜也有很多種設計，經過幾十年的發展，現在的高速逆流色譜一般是采用同步行星式的設計，其主要是利用在高速旋轉狀態產生的二維離心力場的作用下使兩種互不相溶的溶劑快速有效的對流或分割----或者說混合或分層，從而使樣品能夠在短時間內進行成千上萬次萃取，根據樣品中的物質分配系數的不同而進行分離的一種方法。

　　HSCCC 有幾個突出優點：( 1) 無不可逆吸附。聚四氟乙烯管中的固定相無需載體液 -液色譜系統，故而消除了氣 -液和固 -液色譜中因使用載體而帶來的吸附現象，特別適于分離極性物質和生物活性物質；( 2) 高回收率。由于流動相和固定相均為液體，樣品可全部回收，分離純化與制備可同步完成，故特別適于制備性分離；( 3 ) 操作簡便。因固定相為液體，體系更換與平衡方便、快捷。與HPLC 相比，HSCCC 進樣量較大，最多可達數克，

　　是H P L C 的數百倍；與常壓、低壓色譜相比，HSCCC 的分離能力強，有些樣品經一次分離即得到1 個甚至多個單體，且分離時間短，數小時即可完成，純度多在98％以上。

　　高速逆流色譜作為一種比較新穎的分離方法，影響因素主要有溶劑體系的選擇，旋轉速度，流動相的流速，溫度等影響。溶劑體系選擇 即條件的摸索，相當于傳統色譜摸流動相的條件，不同的是高速逆流色譜條件的摸索主要是指樣品在固定相和流動相兩者之間的分配的比值，待分離的樣品的K值最好在0.6-1.5范圍之內，這樣才會有一個好分離效果。轉速主要體現在固定相的保留率上，一般轉速越高固定相保留率也比較高，分離效果也相對的好一些。流速要適中，太大會降低固定相保留率，太低會容易拖尾。溫度是一個非常重要的參數，溫度恒定對體系得重復性有著決定性的影響，比如說冬天，夏天可能同一個溶劑體系就會有著不同的分離效果。

　　高速逆流色譜在藥物領域主要應用在中草藥，合成藥物，抗生素以及蛋白等領域。在天然產物中應用的更廣泛一些，比如生物堿、黃酮、香豆素，蒽醌，皂苷，萜類等都有相應的研究。對于每一類的化合物一般都有一些經典的體系，比如說生物堿用氯仿：甲醇：水（酸水），或者用正己烷：乙酸乙酯：甲醇:水。 在低極性的化合物象揮發油，萜類可以用正己烷：甲醇：水 ，石油醚：甲醇：水等體系 ，皂苷一般用乙酸乙酯：正丁醇：水體系。