醋酸纖維素膜電泳分離鑒定蛋白質實驗_電泳法
混合蛋白質樣品中各種蛋白質的等電點不同, 在pH8 . 6 的巴比妥緩沖液中, 各種蛋白質所帶的靜電荷量不同, 加上蛋白質分子大小不相同, 在電場中移動的速度也不等, 例如, 血清或卵清樣品中白蛋白等電點比其他蛋白質低, 在pH8 . 6 時帶的負電荷比其他蛋白質多, 加上白蛋白的分子較小, 因此在電場中比其他蛋白質移動速度快。這樣, 樣品中的蛋白質在醋酸纖維素膜上就可以形成區帶,實驗方法原理混合蛋白質樣品中各種蛋白質的等電點不同, 在pH8 . 6 的巴比妥緩沖液中, 各種蛋白質所帶的靜電荷量不同, 加上蛋白質分子大小不相同, 在電場中移動的速度也不等, 例如, 血清或卵清樣品中白蛋白等電點比其他蛋白質低, 在pH8 . 6 時帶的負電荷比其他蛋白質多, 加上白蛋白的分子較小, 因此在電場中比其他蛋白質移動速度快。這樣, 樣品中的蛋白質在醋酸纖維素膜上就可以形成區帶, 可以分離和分析蛋白質組成等。另外, 作為純化了的蛋白質電泳......閱讀全文
蛋白質抽取實驗
蛋白質在細菌中表現后，以反復的冷凍-解凍方法打破細胞，再用硫酸銨把蛋白質沉淀下來，此步驟可以去除大部份核酸、多醣、脂質等雜物。儀器用具：恒溫震蕩培養箱37℃；高速冷凍離心機及離心管 （使用20,000 rpm離心陀）使用高速離心機要注意： 離心機及離心陀的溫度要預冷完全，相對位置的兩只離心管要平衡好
蛋白質定量實驗
試劑、試劑盒 考馬斯亮藍 G250乙醇磷酸實驗步驟 (1) 準備 100~1500 ug/ml 的標準品, 溶于 Bradford 法相兼容緩沖液中。對于較稀的樣品，可能通過增加樣品在試劑體積中的比率而擴大靈敏度（microBradfordassay:1~25ug/mL)。如果樣品與染料的比
蛋白質分離實驗
分離未知 pI 蛋白質 分離已知pI 的蛋白質 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 含10
蛋白質合成實驗
實驗步驟材料無菌細胞培養，如 1X104～ 1X106?個細胞，24 孔板3H-亮氨酸。無血淸培養基中 2 MBq /ml (～50uCi/ml) (特異活性并不重要，因為它將由培養基中的亮氨酸濃度決定）非無菌SLS 或 SDS，1% (35m mol/L ) 溶于 0 .3 mol/L NaOH三
蛋白質回收實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 蛋白質 試劑、試劑盒
蛋白質定量實驗
考馬斯亮藍蛋白質濃度分析法 堿性銅還原分析法 胺衍生法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 蛋白質分子中的芳香族氨基酸酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸殘基，其化學結構中
蛋白質合成實驗
實驗步驟 材料 無菌 細胞培養，如 1X104～ 1X106 個細胞，24 孔板 3H-亮氨酸。無血淸培養基中 2 MBq /ml (～50uCi/ml) (特異活性并不重要，因為它將由培養基中的亮氨酸濃度決定） 非無菌 SLS 或
蛋白質回收實驗
實驗材料蛋白質試劑、試劑盒SDSDTT脫色液染色液儀器、耗材電泳儀透析膜實驗步驟1. ?凝膠浸泡在染色液中于室溫緩慢搖動染色15~20 min，然后移至脫色液中于4℃溫和搖動下脫色2~3 h。2. ?切下染色后的凝膠條帶，于4℃水中浸泡2~3 h，期間換幾次水。然后分別將每條膠移入Petri培養皿中
蛋白質染色實驗
實驗材料 蛋白質試劑、試劑盒 聚丙烯酰胺凝膠固定液染色液脫色液儀器、耗材 濾紙培養箱實驗步驟 1. ?將聚丙烯酰胺凝膠放在塑料容器并以3~5倍體積的固定液覆蓋，在旋轉搖床中緩慢揺動2 h。?2. ?傾去固定液，以考馬斯亮藍染色液覆蓋凝膠，并緩慢搖動4 h。3. ?傾去染色液，用約50 ml 固定液沖
蛋白質染色實驗
考馬斯亮藍染色 銀染法 非氨鹽銀染法 快速銀染法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 1. 凝膠中蛋白質的定位可用考馬斯亮藍染料染色或銀染色。前者簡便
蛋白質合成實驗
實驗步驟 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 材料 無菌 細胞培養，如 1X104～ 1X106 個細胞，24 孔板 3H-亮氨酸。無血淸培養基中 2 MBq /ml (～50uCi/ml) (特異活性并不重要
蛋白質分離實驗
實驗方法原理 實驗材料 含10 mg蛋白質／ml 的溶于水的樣品試劑、試劑盒 硼酸鈉儀器、耗材 50 μm 內徑的包被的融合硅毛細管柱CE 儀器實驗步驟 1. 用 50 mmol/L 硼酸鈉緩沖液 1/10（V/V） 稀釋蛋白質樣品，使終濃度 1.0 mg/ml，也可在 50 mmol/L 硼酸鈉緩
蛋白質回收實驗
實驗材料 蛋白質試劑、試劑盒 SDSDTT脫色液染色液儀器、耗材 電泳儀透析膜實驗步驟 1. ?凝膠浸泡在染色液中于室溫緩慢搖動染色15~20 min，然后移至脫色液中于4℃溫和搖動下脫色2~3 h。2. ?切下染色后的凝膠條帶，于4℃水中浸泡2~3 h，期間換幾次水。然后分別將每條膠移入Petri
蛋白質合成實驗
實驗步驟 材料無菌細胞培養，如 1X104～ 1X106 個細胞，24 孔板3H-亮氨酸。無血淸培養基中 2 MBq /ml (～50uCi/ml) (特異活性并不重要，因為它將由培養基中的亮氨酸濃度決定）非無菌SLS 或 SDS，1% (35m mol/L ) 溶于 0 .3 mol/L NaOH
蛋白質分離實驗_分離未知－pI－蛋白質
用 CE 進行 IEF分離是選擇隨后用于在非衍生毛細管柱上分離蛋白的緩沖液系統的有效的第一步。如果沒有檢測到蛋白質，可能是被吸收到柱的硅表面。在離子去垢劑如 SDS 存在的情況下重復分離過程，這樣就會用負電荷包被蛋白質從而阻止吸收。但是，這意味著蛋白質只能依據大小的不同而進行分離。知道蛋白質的 pI
蛋白質定量實驗步驟
?(1) 準備 100~1500 ug/ml 的標準品, 溶于 Bradford 法相兼容緩沖液中。對于較稀的樣品，可能通過增加樣品在試劑體積中的比率而擴大靈敏度（microBradfordassay:1~25ug/mL)。如果樣品與染料的比值太高, 可能會增加反應混合物的 PH 而導致反應背景較高
蛋白質的純化實驗
實驗材料 Sephacryl S-300膠體試劑、試劑盒 緩沖液buffer A-150儀器、耗材 色析管柱鐵夾試管鐵架水平儀收集器濃縮用離心機 濃縮用離心管實驗步驟 一、儀器設備色析管柱 （Pharmacia C column, 1.6×100 cm）、鐵架、鐵夾及水平儀；部分收集器（frac
蛋白質印跡實驗
試劑、試劑盒?甘氨酸TrisSDS甲醇實驗步驟 1. 溶液配置(1) 連續緩沖系統甘氨酸 39 mmol/L；Tris 48 mmol/L；SDS 0.0375% ( W/V)；甲醇 20% (V/V)。溶液均需用雙蒸水配置。這個緩沖系統可用作陽極緩沖液，也可用作陰極緩沖液。(2) 不連續緩沖系統陽
蛋白質的純化實驗
膠體過濾法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 Sephacryl S-300膠體 試劑、試劑盒
蛋白質的純化實驗
不發生電泳現象，蛋白質粒子帶負電荷，在電場中向負極移動，蛋白質粒子帶正電荷；在等電點偏堿性溶液中，在電場中向正極移動，可以將蛋白質進行分離純化。這種現象稱為蛋白質電泳(Electrophoresis).蛋白質的分離純化的一般原則①高回收率②高純度③高活性④方便與快捷⑤經濟蛋白質的分離純化的一般步驟①
蛋白質含量測定實驗
folin—酚試劑法 考馬斯亮藍法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 這種蛋白質測定法是最靈敏的方法之一。過去此法是應用最廣泛的一種方法，由于其試劑乙的配制較為困難（
蛋白質濃度分析實驗
BRADFORD分析（BIORAD)BCA分析(PIERCE)三氯乙醇沉淀實驗材料標準蛋白質 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒BSA ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
蛋白質含量測定實驗
Bradford法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 蛋白質 試劑、試劑盒
蛋白質的分離實驗
實驗方法原理 凡鹽析所獲得的粗制蛋白質（鹽析得到的IgG）中均含有硫酸銨等鹽類，這類將影響以后的純化，所以純化前均應除去，此過程稱為“脫鹽”（desalthing）。脫鹽常用透析法和凝膠過濾法，這兩種方法各有利弊。前者的優點是透析后析品終體積較小，但所需時間較長，且鹽不易除盡；凝膠過濾法則能將鹽除盡
蛋白質純度測定實驗
實驗步驟在評價樣品純度之前，首先需要鑒定待測雜質的類型，如核酸、碳水化合物、脂質、無關蛋白質、同工酶類、失活蛋白質，進而確定在特定溶液條件中, 能夠區分假定雜質和目標蛋白質的理化特性 (化學分析或物理特征）。而純度則是指待測雜質含量低于某個特定水平。需要注意的是，上述說明中并沒有要求描述雜質的性質。
蛋白質的分離實驗
凝膠層析法 IEF（等電點聚焦電泳）法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 凡鹽析所獲得的粗制蛋白質（鹽析得到的IgG）中均含有硫酸銨等鹽類，這類將影響以后的純化，所以純
蛋白質濃度分析實驗
BRADFORD分析（BIORAD) BCA分析(PIERCE) 三氯乙醇沉淀 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 標準蛋白質
蛋白質純度測定實驗
蛋白質純度測定實驗 ? ? ? ? ? ? 實驗步驟 在評價樣品純度之前，首先需要鑒定待測雜質的類型，如核酸、碳水化合物、脂
蛋白質含量測定實驗
實驗材料?蛋白質試劑、試劑盒?牛血清NaCl考馬斯亮藍儀器、耗材?分光光度計離心機實驗步驟 ? 分別在兩組微量離心管中各加入0.5 mg/ml 牛血清白蛋白，以 0.15 mmol/l NaCl補足至100 μl，同時以兩管100 μl 的0.15 mmol/l NaCl作空白對照。2.? 每管各加
蛋白質印跡實驗
從SDS凝膠上轉移蛋白質 從瓊脂糖凝膠上轉移蛋白質 從等電聚焦凝膠上轉移蛋白 檢測 ? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒