HE染色石蠟切片制作的基本過程
HE染色石蠟切片制作的基本過程:1、取材與固定從人或動物新鮮尸體上取下組織塊(一般厚度不超過0.5厘米)投入預先配好的固定液中(10%福爾馬林,Bouin氏固定液等)使組織、細胞的蛋白質變性凝固,以防止細胞死后的自溶或細菌的分解,從而保持細胞本來的形態結構。2、脫水透明一般用由低濃度到高濃度酒精作脫水劑,逐漸脫去組織塊中的水份。再將組織塊置于既溶于酒精,又溶于石蠟的透明劑二甲苯中透明,以二甲苯替換出組織塊的中酒精,才能浸蠟包埋。3、浸蠟包埋將已透明的組織塊置于已溶化的石蠟中,放入溶蠟箱保溫。待石蠟完全浸入組織塊后進行包埋:先制備好容器(如折疊一小紙盒),倒入已溶化的石蠟,迅速夾取已浸透石蠟的組織塊放入其中。冷卻凝固成塊即成。包埋好的組織塊變硬,才能在切片機上切成很薄的切片。4、切片與貼片將包埋好的蠟塊固定于切片機上,切成薄片,一般為5—8微米厚。切下的薄片往往皺折,要放到加熱的水中燙平,再貼到載玻片上,放45℃恒溫箱中烘干。5、......閱讀全文
HE染色石蠟切片制作的基本過程
HE染色石蠟切片制作的基本過程:1、取材與固定從人或動物新鮮尸體上取下組織塊(一般厚度不超過0.5厘米)投入預先配好的固定液中(10%福爾馬林,Bouin氏固定液等)使組織、細胞的蛋白質變性凝固,以防止細胞死后的自溶或細菌的分解,從而保持細胞本來的形態結構。2、脫水透明一般用由低濃度到高濃度酒精作脫
石蠟切片制作基本技術
石蠟切片 石蠟切片(paraffin section) 組織學常規制片技術中最為廣泛應用的方法。石蠟切片不僅用于觀察正常細胞組織的形態結構,也是病理學和法醫學等學科用以研究、觀察及判斷細胞組織的形態變化的主要方法,而且也已相當廣泛地用于其他許多學科領域的研究中。教學中,光鏡下觀察切片標本多數是石蠟
石蠟切片術的制作過程
光學顯微標本的制作技術【實驗目的】了解光學顯微鏡切片制作技術的基本方法步驟。【實驗原理】采用光學顯微鏡研究一般生物體的內部結構,在自然狀態下是無法觀察清楚的,多數動、植物材料都必須經過某種處理,將組織分離成單個細胞或薄片,光線才能通過細胞。為了適應這個需要,就產生了光學顯微鏡制片技術。光學顯微鏡的制
石蠟切片的制作
以石蠟制作的切片,可以制成極薄的切片。一般的切片厚度要求在4—6微米。而石蠟切片不但可以達到這個要求,甚至可以切得更薄到2微米以至1微米。這一點是冰凍切片和火棉膠切片難以獲得的結果。另外,石蠟切片還便于制作大批的或是連續的切片。而且以石蠟包埋的組織塊便于長期保存。所以石蠟切片是目前各種切片制作方法中
石蠟切片的制作
以石蠟制作的切片,可以制成極薄的切片。一般的切片厚度要求在4—6微米。而石蠟切片不但可以達到這個要求,甚至可以切得更薄到2微米以至1微米。這一點是冰凍切片和火棉膠切片難以獲得的結果。另外,石蠟切片還便于制作大批的或是連續的切片。而且以石蠟包埋的組織塊便于長期保存。所以石蠟切片是目前各種切片制作方法中
石蠟切片制作過程有哪些步驟
石蠟切片操作步驟:1、取材2、固定3、脫水:30%--50%---70%(每步60分鐘)---85%---95%--100%---100%(每步30鐘)。4、透明:轉入1/2二甲苯+1/2無水酒精混合液20ml透明1h,純二甲苯20ml透明1h,再用純二甲苯20ml透明40min,并回收各液。5、浸
石蠟切片和半薄切片的制作
實驗概要本方法介紹了石蠟切片和半薄切片的制作流程。主要試劑4%戊二醛固定液(pH7.0磷酸緩沖液),乙醇,二甲苯,純石蠟,蜂蠟,樹脂膠主要設備真空泵,AO手搖式切片機,Olypmus BH-2型顯微鏡,LKB超薄切片機實驗步驟1. 石蠟切片的制作?? 1) 取材固定新鮮配置4%戊二醛固定液(pH7.
光學顯微鏡的石蠟切片制作過程
? ? I.將組織塊放入帶標記的盒子內,光學顯微鏡置于200m1液體中;? ? 2.按選定的溫度加熱;測定溫度。? ? 3.光學顯微鏡3%戊二醛預固定15秒鐘;緩沖液沖洗3次,光學顯微鏡每次3分鐘;1 %OsO;固定15秒鐘。如中斷操作,預固定后仍需在4℃下保存.? ? 用微波脫水、浸透每一步驟只需
植物組織石蠟切片的制作
一、實驗目的 1.熟練掌握石蠟切片的方法。 2.掌握永久制片的制作過程,為研究植物的內部結構奠定基礎。 3.學會植物內部結構的比較研究方法。 二、實驗器具與 試劑1.器具 石蠟切片機、烘箱、顯微鏡、染色缸、小培養皿、鑷子、毛筆、吸水紙、紗布、載玻片、蓋玻
石蠟切片的基本技術
說明石蠟切片法包括取材、固定、洗滌和脫水、透明、浸蠟、包埋、切片與貼片、脫蠟、染色、脫水、透明、封片等步驟。一般的組織從取材固定到封片制成玻片標本需要數日,但標本可以長期保存使用,為永久性顯微玻片標本。取材應根據要求選取材料來源及部位。例如植物細胞有絲分裂多選取洋蔥根尖,細胞分裂快又便于切取;豬的肝
石蠟切片陰性染色產生的原因
⑴一抗和二抗濃度不合適或孵育條件不妥。⑵熒光素提前衰退。熒光素質量不佳或操作過程中沒有注意避光等防止熒光素衰退的事項。⑶血清封閉時間過長。⑷抗體稀釋液PH值不合適,影響抗原抗體反應。⑸組織切片不平、裂片或脫片很嚴重,易引起大塊陰性著色。⑹組織標本不新鮮或已經冷凍組織制成的切片中抗原易彌散,易引起本來
石蠟塊做超薄切片的樣品制作流程
石蠟塊做超薄切片的樣品制作流程如下:?1、取材:從石蠟塊上相應部位切下約1mm3?的小塊。?2、溶蠟:將取下的標本放在一張濾紙上,40℃烘箱內烘1小時,然后轉放入二甲苯溶液中40℃烘箱內繼續浸泡8—12h。?3、水化:純丙酮30分鐘、90%、80%、70%丙酮各15分鐘。?4、漂洗:用緩沖液漂洗(0
石蠟切片免疫組化染色
實驗概要掌握石蠟切片免疫組化染色實驗中載玻片的處理,常用酶消化,抗原熱修復及基本實驗步驟。實驗步驟1. 載玻片的處理 ??? 1) APES:現用現配。將洗凈的玻片放入以1:50比例丙酮稀釋的APES中,停留20~30秒鐘,取出稍停片刻,再入純丙酮溶液或蒸餾水中涮去未結合的APES,置通風櫥
石蠟切片免疫組化染色
實驗概要掌握石蠟切片免疫組化染色實驗中載玻片的處理,常用酶消化,抗原熱修復及基本實驗步驟。實驗步驟1. 載玻片的處理 ??? 1) APES:現用現配。將洗凈的玻片放入以1:50比例丙酮稀釋的APES中,停留20~30秒鐘,取出稍停片刻,再入純丙酮溶液或蒸餾水中涮去未結合的APES,置通風櫥
石蠟切片的基本信息
石蠟切片(paraffin section)?組織學常規制片技術中最為廣泛應用的方法。石蠟切片不僅用于觀察正常細胞組織的形態結構,也是病理學和法醫學等學科用以研究、觀察及判斷細胞組織的形態變化的主要方法,而且也已相當廣泛地用于其他許多學科領域的研究中。教學中,光鏡下觀察切片標本多數是石蠟切片法制備的
石蠟切片制作(蘇木精伊紅對染法)
石蠟切片制作可以用于:(1)保持細胞間的正常的相互關系,能較好和較長時間地保留細胞的原貌。(2)是光學顯微鏡的主要制片方法。實驗方法原理石蠟切片是最基本的切片技術,冰凍切片和超薄切片等都是在石蠟切片基礎上發展起來的。蘇木素與伊紅對比染色法(簡稱 H.E. 對染法)是組織切片最常用的染色方法。這種方法
樹脂切片制作過程
一、實驗儀器及試劑1.器具電子天平、70℃恒溫箱、玻璃制刀機、半/超薄切片機、顯微鏡、包埋模、制刀用的玻璃條、鑷子、刀片。?2.試劑?(1)固定劑:FAA?(2)脫水劑:20%、40%、60%、80%、90%、95%、100%的乙醇;丙酮(3)樹脂:Spurr樹脂(4)染色劑:1%堿性品紅二、實驗步
石蠟切片免疫組化染色步驟
1、載玻片的處理:抗原修復過程中,由于高溫、高壓、輻射等諸多因素的影響,極易造成脫片。為保證試驗的正常進行,可選用我公司提供的ZLI-9001 APES、ZLI-9003 HistogripTM或ZLI-9005 Poly-L-Lysine等幾種試劑,對已清洗的載玻片進行處理。具體方法如下:1.1
石蠟切片免疫組化染色方法
1、載玻片的處理:抗原修復過程中,由于高溫、高壓、輻射等諸多因素的影響,極易造成脫片。為保證試驗的正常進行,可選用我公司提供的ZLI-9001 APES、ZLI- 9003 HistogripTM或ZLI-9005 Poly-L-Lysine等幾種試劑,對已清洗的載玻片進行處理。具體方法如下:1.1
石蠟切片制作(蘇木精伊紅對染法)(二)
5.透明純酒精、二甲苯等量混合液15min,二甲苯Ⅰ15min、Ⅱ15min(至透明為止)。由于乙醇與石蠟不相溶,而二甲苯既能溶于乙醇又能溶于石蠟,所以脫水后還要經過二甲苯以過渡。當組織中全部被二甲苯占有時,光線可以透過,組織呈現出不同程度的透明狀態。透明注意事項(1)使用透明劑時,要隨時蓋緊蓋子,
石蠟切片制作(蘇木精伊紅對染法)(一)
實驗方法原理 石蠟切片是最基本的切片技術,冰凍切片和超薄切片等都是在石蠟切片基礎上發展起來的。蘇木素與伊紅對比染色法(簡稱 H.E. 對染法)是組織切片最常用的染色方法。這種方法適用范圍廣泛,對組織細胞的各種成分都可著色,便于全面觀察組織構造,而且適用于各種固定液固定的材料,染色后不易褪色可
石蠟切片在染色過程中出現脫片現象如何處理?
1)烤片時間不夠,或溫度不夠,可以延長烤片時間和提高烤片溫度;2)用含有多聚賴氨酸的玻片,可以購買到或這自己做;3)有些組織本身就容易掉片,如骨組織等,操作時沖PBS不要直接沖到組織上,沖到組織上方,讓它流下沖洗組織;4)用高溫修復時,溫度驟冷也可能引起。
石蠟切片與冰凍切片
一、組織和細胞標本類型:(一) 組織標本類:1、 石蠟切片:組織形態保存好2、 冰凍切片:抗原性保存好(二)細胞標本類:1、組織印片 2、細胞培養片(細胞爬片) 3、細胞涂片二、組織取材1、腦組織和神經組織應采用灌注固定后,再進行后固定。2、組織取材注意事項:(1)標本新鮮:組織要求離體后30min
石蠟切片免疫組織化學染色
主要試劑染色缸;染色架;保濕盒;晾片盤;微量移液器;0.2MPBS,乙醇,二甲苯,BSA,中性樹膠等實驗步驟1.?????石蠟切片放置在60℃恒溫箱中烘烤120分鐘;2.?????脫蠟和水化:二甲苯(10min)→二甲苯(10min)→無水乙醇(5min×2次)→95%乙醇(5min×2)→90%(
石蠟制片法(用于免疫組織化學,HE染色)
?石蠟制片法是將材料經固定、脫水、透明、浸蠟后包埋在石蠟里面進行切片的方法。此法適用范圍,制片手段完備,能將材料切成極薄的片子(可切至2-8微米左右),并能制成連續的片子,這是其它制片法難以達到的,因此在光學顯微鏡的制片技術上它是最常用的一種方法。除了一些經不住石蠟切片法中所應用的各種藥劑處理的材料
石蠟切片與冷凍切片的區別
1、從一抗的選擇方面來看。有的一抗既能做石蠟切片又能做冰凍切片,而有的一抗只能做冰凍切片,關鍵取決于所要檢測的抗原穩定性,有的抗原不穩定,經過組 織固定,脫水、透明、浸蠟、包埋、脫蠟等一系列的做石蠟切片的步驟,所檢測的抗原易被破壞,這時只能用冰凍切片來做,檢測這類抗原的一抗只能做冰凍切片, 而那些穩
石蠟切片和冰凍切片的比較
(1)要求做冰凍切片的不一定能做石蠟切片,這是今天我向一老師請教得出的結論。因為作石蠟切片時要高溫烤片,可能會破壞組織的抗原性,如果組織的抗原性較穩定,則可作石蠟切片;但是要求做石蠟切片的,可作冰凍切片。(2)冰凍切片的優點是能夠較好的保存組織的抗原免疫活性,做免疫組化時不需抗原修復這一步。缺點是細
石蠟切片、冰凍切片及振動切片的區別
一、石蠟切片??? 把修好的蠟塊裝在旋轉切片機上,即可進行切片(section)。切片必須保持切片刀銳利,切片厚度通常為5~7um,也可根據染色需要切成不同厚度,一般不旋轉式切片機超過10um。切好的蠟帶,放人40℃左右的溫水中將蠟片展平。良好的切片應無刀痕、裂痕,切片厚度均一平整。切片如有上述
石蠟切片(paraffin-sections)免疫組化染色步驟
1、載玻片的處理:抗原修復過程中,由于高溫、高壓、輻射等諸多因素的影響,極易造成脫片。這里選用ZLI-9001 APES、ZLI- 9003 HistogripTM或ZLI-9005 Poly-L-Lysine等幾種試劑,對已清洗的載玻片進行處理。具體方法如下:(1)APES:現用現配。將洗凈的玻片
石蠟切片免疫組化染色實驗操作流程
1.石蠟切片脫蠟至水:(石蠟切片染色前應置 60℃ 1 小時) 。① 二甲苯 、II,各 10 分鐘。② 梯度酒精:100%,2 分鐘 95%,2 分鐘 80%,2 分鐘 70% 2 分鐘。③ 蒸餾水洗:5 分鐘,2 次(置于搖床)。2.過氧化氫封閉內源性過氧化物酶:3%H2 O2 ,室溫 10 分