WB實驗小問答
WB又稱免疫印記法.是將生物大分子物質通過不同途徑轉移到固相載體的過程。其靈敏，可達ng級，用Ecl顯色法理論上可達pg 級。方便，特異性高。今天給大家分析的是western blot實驗中那些常見的問題，這份干貨內容，請收好啦！ western blot 常見問題有那些？ 1.為什么我的細胞提取液中沒有目標蛋白？ 答：原因有很多，①你的細胞中不表達這種蛋白質，換一種細胞；②你的細胞中的蛋白質被降解掉了，你必需加入PMST，抑制蛋白酶活性；③你的抗體不能識別目標蛋白，多看看說明，看是否有問題。 2.我的細胞提取液有的有沉淀，有的很清亮，為什么呢？ 答：①有沉淀可能是因為你的蛋白沒有變性完全，可以適當提高SDS 濃度，同時將樣品煮沸時間延長。②也不排除你的抗原濃度過高，這時再加入適量sam......閱讀全文
WB實驗問題總結
答：原因有很多：a) 你的細胞中不表達這種蛋白質，換一種細胞；b) 你的細胞中的蛋白質被降解掉了，你必需加入PMSF，抑制蛋白酶活性；c) 你的抗體不能識別目標蛋白，多看看說明，看是否有問題。答：a) 有沉淀可能因為你的蛋白沒有變性完全，可以適當提高SDS 濃度，同時將樣品煮沸時間延長；b) 也不排
WB實驗小問答
? WB又稱免疫印記法.是將生物大分子物質通過不同途徑轉移到固相載體的過程。其靈敏，可達ng級，用Ecl顯色法理論上可達pg 級。方便，特異性高。今天給大家分析的是western blot實驗中那些常見的問題，這份干貨內容，請收好啦！? ? western blot 常見問題有那些？? ? 1.為什
WB實驗的那些事兒
1.二抗需和一抗宿主的物種相同（如一抗來自兔，二抗為抗兔抗體）。原因： 一抗和二抗不匹配。2.參照說明書，設置陽性對照。原因：一抗不識別檢測物種蛋白。3.每泳道蛋白上樣量不低于20~30μg，設置陽性對照。原因：抗原量不足。4.使用可逆染色劑如麗春紅S檢測轉膜效果，檢測轉膜操作是否正確。PVDF膜預
wb實驗的原理和步驟
WB實驗是通過聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）將混合蛋白質樣品分離后，利用特殊虹吸或電場裝置印跡至固相介質（例如PVDF膜）上。再以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原，與相對應的第一抗體特異性結合，之后再與酶或同位素標記的第二抗體相結合，最終通過底物顯色或放射自顯影來檢測特異性目的基因表達的蛋白成分。
IHC,ELISA,WB實驗之間的區別
免疫組化、Western、ELISA，是免疫學三大常用工具，分別用于定位，定性和定量。那么，我們今天就來說說這三者之間的差別以及其具體使用的場景。1、IHC中文名稱：免疫組化英文名稱：Immunohistochemistry簡介：是融合了免疫學原理(抗原抗體特異性結合)和組織學技術(組織的取材、固定
巴傲得生物WB實驗流程
凝膠濃度與蛋白質分離范圍凝膠濃度％ （W/V）最適分離范圍（KD）7.570-20010.050-15012.030-10015.012-4520.04-30不同濃度分離膠的制備（兩塊膠）組分7.5％10％12％15％20％Tris-HCL緩沖液*3.75ml3.75 ml3.75 ml3.75 m
WB實驗虐我千百遍，我待實驗如初戀
大家都知道Western Blot時間周期較長，大致可以分為忙碌的第一天，和心痛的第二天，像極了愛情。人生若只如初見，何事秋風悲畫扇。經歷轉瞬即逝的新手曙光后，便進入漫長的黑夜。 第一天，從最一步的配膠，到最后一步的孵育膜都極細心像極了愛情的萌芽期，需要精心的呵護。第二天經過繁瑣的洗膜，孵
如何使用Image－J分析WB的實驗結果
1、在百度上搜索Image J軟件然后下載到電腦上安裝完畢。安裝好Image J軟件后，將你做的WB的片子進行掃描，得到掃描版圖片。2、完成步驟1后，裝好Image J軟件后，點擊軟件上方的File，下拉點擊Open，將掃描圖片拉入進入軟件中。接著點擊軟件上方的Image，下拉第一個是Type，點擊
wb實驗分離膠立馬就凝固了行么
透明膠郵票粘在一起，要分而不損傷郵票的確是件很麻煩的事。用電吹風或水泡等也不失為好辦法。但剛開始不要盲目用電吹風或水泡等辦法用在郵票上，以免損傷郵票。你可以用透明膠粘在和郵票差不多的廢紙上(最好是撕下廢棄無用的郵票邊紙上)做個試驗，先用電吹風吹，如果沒有效，再用水泡等方法。試驗成功取得經驗后，再用到
檢測蛋白用WB實驗還是ELISA實驗好它們有什么區別
? 檢測蛋白的實驗有很多種,WB實驗和ELISA實驗是比較常用的兩種實驗方法,這兩種方法哪一種的實驗結果更為可靠呢?有些人說ELISA自己包被抗體的話會比較麻煩，WB相比更加科學，容易被雜志接納。但是血清中沒有內參可以選擇。是不是ELISA實驗操作要簡單很多，那么又如何來解決這樣的一個問題呢？今天上
（WB）實驗最后顯色過程中總是沒有條帶
沒有條帶的原因很多：可能沒封閉好，一抗是不是回收次數太多了，二抗不好用，TBST長毛了，等等。這個還有做外包的呀，我們這邊實驗室western是最普遍的實驗了。
做完edu細胞增殖實驗的細胞，還能做WB嗎
實驗目的是什么～檢測做完實驗的該細胞蛋白量？可以啊～反正WB也是要裂解細胞取上清蛋白制樣的～只要你目的蛋白沒降解就行～
在WB實驗中為什么需要使用內參抗體？
在WB實驗中為什么需要使用內參抗體？進口內參抗體——在WB實驗中為什么需要使用內參抗體？???? 要檢測一個基因的表達產物是否正確，或者比較表達產物量的相對變化，首選方法是Western Blot。雖然，順利的時候Western Blot做起來很簡單，可不順的時候也很令人心煩――做不出結果啦、假陽性
wb－蛋白在重復實驗時還需要煮嗎
wb 蛋白在重復實驗時還最好是再煮一下在第一次wb時候，蛋白樣品加入上樣緩沖液并煮沸。如果重復實驗是重新取樣加上樣緩沖液的話，應該是要重復之前的步驟，煮沸后上樣如果重復實驗沒有重新取樣用了之前的樣品，那么因為SDS溫度較低是可能會有部分析出，所以重復實驗前最好還是再煮一下
分子量較大的蛋白怎么做wb實驗
分子量較大的蛋白做wb實驗和其他蛋白并沒有什么特別的不同主要注意幾個地方合適的內參印染，一般用的比較多的幾種內參分子量都比較小（30~50KD）合適的凝膠，膠濃度要配制的稀一些，一般選擇3%~10%的凝膠增加轉膜時間，分子量較大的蛋白要完全轉到膜上需要更長的時間
在WB實驗中為什么需要使用內參抗體？
要檢測一個基因的表達產物是否正確，或者比較表達產物量的相對變化，首選方法是Western Blot。雖然，順利的時候Western Blot做起來很簡單，可不順的時候也很令人心煩――做不出結果啦、假陽性啦、結果出現多條帶啦、到底是一抗有問題還是二抗有問題啦……畢竟，作為一種有活性的生物大分子
wb－蛋白在重復實驗時還需要煮嗎
蛋白樣品的制備是蛋白質組研究的第一步，無論后續采用怎樣的分離或鑒定手段，樣品制備都是關鍵步驟。因此，為了完全分析所有的細胞內蛋白，組織與細胞必須進行有效的破碎。本文在此介紹幾種較為常見的方法。變性條件——SDS LB直接裂解：用常溫或者高溫預熱過（預熱更有利于阻止蛋白水解或者磷酸酶去磷酸化，但容易遺
WB顯影要多久
每個顯影試劑盒都不一樣，建議看說明書。實際情況視熒光強度而定，你看顯出一點兒樣子了，就趕緊撈出來，不然片子就太黑了。在加熒光劑后，反應大概一到四分鐘。小心把膜放到暗盒里，放好后再也不要移動膜，否則熒光會消失。膜上覆蓋一張保鮮膜，小心，鋪展。將準備好的膠片放在膜上，放上去后也不要再移動了。然后壓片。可
WB操作規程
一、設備和試劑1．設備① 電泳電源Mini-PROTEAN 3 Elecreophoresis Cell,Mini Teans-Blot Module,and PowerPac Basic Power Supply (BIO-RAD,Catalog#165-3323)② 電泳儀及附件Mini-PRO
WB顯影要多久
每個顯影試劑盒都不一樣，建議看說明書。實際情況視熒光強度而定，你看顯出一點兒樣子了，就趕緊撈出來，不然片子就太黑了。在加熒光劑后，反應大概一到四分鐘。小心把膜放到暗盒里，放好后再也不要移動膜，否則熒光會消失。膜上覆蓋一張保鮮膜，小心，鋪展。將準備好的膠片放在膜上，放上去后也不要再移動了。然后壓片。可
關于WB實驗中蛋白樣品制備的常見問題分析
WB實驗又稱免疫印跡實驗，是根據抗原抗體的特異性結合檢測復雜樣品中的某種蛋白的方法。該法是在凝膠電泳和固相免疫測定技術基礎上發展起來的一種新的免疫生化技術，具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性，現已成為蛋白分析的一種常規技術。 對于一直都在做蛋白研究的你，在樣品制備
流式、WB、RT－PCR等實驗所需細胞數問題
1、流式所需細胞數問：我目前準備做流式，要做10 個標本，但是細胞總數不多了，我能不能把原來在100ml培養瓶培養的細胞轉移到25ml里培養，這樣把細胞重懸后，1個100ml的可以分到4個25ml里。請問這樣可以嘛？細胞數夠嘛？據說做流式至少要105次方個細胞以上才行。丁香網友漂泊認為：細胞數是夠的
wb轉膜條件公式
wb轉膜條件公式：10% SDS溶液(m/v)。將電泳后分離的蛋白質從凝膠中轉移到固相載體（例如NC膜）上，通常有兩種方法：毛細管印跡法和電泳印跡法。常用的電泳轉移方法有濕轉和半干轉。兩者的原理完全相同，只是用于固定膠/膜疊層和施加電場的機械裝置不同。前者操作容易，轉移效率高；而后者適用于大膠的蛋白
wb轉膜條件公式
wb轉膜條件公式：10% SDS溶液(m/v)。將電泳后分離的蛋白質從凝膠中轉移到固相載體（例如NC膜）上，通常有兩種方法：毛細管印跡法和電泳印跡法。常用的電泳轉移方法有濕轉和半干轉。兩者的原理完全相同，只是用于固定膠/膜疊層和施加電場的機械裝置不同。前者操作容易，轉移效率高；而后者適用于大膠的蛋白
wb二抗怎么融化
wb 二抗融化，wb 抗體用5%的脫脂奶粉或者1%的BSA （千分之一的TBST的溶液 )配置，可以先讓抗體和奶粉或者BSA 蛋白非特異結合，這樣就不會與PVDF 膜上的蛋白結合了。
wb轉膜條件公式
wb轉膜條件公式：10% SDS溶液(m/v)。將電泳后分離的蛋白質從凝膠中轉移到固相載體（例如NC膜）上，通常有兩種方法：毛細管印跡法和電泳印跡法。常用的電泳轉移方法有濕轉和半干轉。兩者的原理完全相同，只是用于固定膠/膜疊層和施加電場的機械裝置不同。前者操作容易，轉移效率高；而后者適用于大膠的蛋白
wb轉膜條件公式
wb轉膜條件公式：10% SDS溶液(m/v)。將電泳后分離的蛋白質從凝膠中轉移到固相載體（例如NC膜）上，通常有兩種方法：毛細管印跡法和電泳印跡法。常用的電泳轉移方法有濕轉和半干轉。兩者的原理完全相同，只是用于固定膠/膜疊層和施加電場的機械裝置不同。前者操作容易，轉移效率高；而后者適用于大膠的蛋白
wb轉膜條件公式
wb轉膜條件公式：10% SDS溶液(m/v)。將電泳后分離的蛋白質從凝膠中轉移到固相載體（例如NC膜）上，通常有兩種方法：毛細管印跡法和電泳印跡法。常用的電泳轉移方法有濕轉和半干轉。兩者的原理完全相同，只是用于固定膠/膜疊層和施加電場的機械裝置不同。前者操作容易，轉移效率高；而后者適用于大膠的蛋白
WB實戰之抗體孵育
由于抗原和抗體特異性結合的效率是非特異性結合的數百萬--數十億倍，所以當特異性抗體與非特異性'抗體'（不好描述，指添加在抗體稀釋液中的封閉蛋白，我們可以把它們看成非特異性的一抗）競爭時，盡管抗體稀釋液中封閉蛋白的濃度是一抗濃度20K：1以上，在碰撞幾率相同的條件下，由于時間的積累
Western－Blot（WB）實驗最后顯色過程中總是沒有條帶
沒有條帶的原因很多：可能沒封閉好，一抗是不是回收次數太多了，二抗不好用，TBST長毛了，等等。這個還有做外包的呀，我們這邊實驗室western是最普遍的實驗了。