超多重PCR技術及其在臨床病原微生物檢測的應用（三）
2.2.2 基于分子的病原體檢測技術2.2.2.1蛋白檢測目前針對病原體蛋白的直接檢測使用質譜技術，基于已建立的微生物胞膜蛋白質、脂多糖、核酸等的數據庫對微生物進行精準鑒定和分析。質譜方法針對培養后濃度較高、品種較為單一的待測樣品，通過獲得其蛋白質圖譜，再與已知微生物構建的數據庫的參考圖譜進行比對，從而鑒定病原微生物。質譜檢測技術高效快速且成本低，加之其高靈敏度、高特異性和高準確性的特點，在臨床微生物檢測等方面獲得了廣泛的應用，用于多類型樣本中細菌和真菌的直接鑒定。但目前僅能處理培養后菌株等相對單純樣品，難以對原始臨床標本中復雜背景樣品進行病原檢測，檢測內容也僅限于病原體分型，在生物耐藥性分析和毒力研究等方面進展較少。2.2.2.2核酸檢測基于核酸的檢測早期使用PCR的方式，對病原微生物基因組或轉錄組片段進行特異性擴增，再對擴增片段進行鑒定或片段擴增進程進行分析，從而實現病原體的鑒定。PCR技術的具體原理如上文所述，在病原微生物......閱讀全文
超多重PCR技術及其在臨床病原微生物檢測的應用（三）
2.2.2 基于分子的病原體檢測技術2.2.2.1蛋白檢測目前針對病原體蛋白的直接檢測使用質譜技術，基于已建立的微生物胞膜蛋白質、脂多糖、核酸等的數據庫對微生物進行精準鑒定和分析。質譜方法針對培養后濃度較高、品種較為單一的待測樣品，通過獲得其蛋白質圖譜，再與已知微生物構建的數據庫的參考圖譜進行比對，
超多重PCR技術及其在臨床病原微生物檢測的應用（二）
1.3 靶向-NGS（tNGS）技術的應用超多重PCR兼具PCR對于特定微量DNA模板的特異性擴增性能以及多個片段同步擴增的能力，配合NGS測序，會擁有比普通宏基因組，全外顯子組測序更為靈敏的特定基因檢出率，此外前期建庫流程更加簡便易行并具有相當大的成本優勢。目前tNGS技術的應用范圍至少包括遺傳疾
超多重PCR技術及其在臨床病原微生物檢測的應用（一）
一超多重PCR技術簡介1.1 PCR及多重PCR技術1.1.1 PCR技術聚合酶鏈式反應(PCR)是一種在體外是用已知寡核苷酸引物引導未知片段中微量待測基因片段進行擴增的技術。PCR反應體系主要包括待擴增樣品模版、特異性引物、DNA聚合酶(polymerase)、擴增底物dNTPs以及含有Mg2+的
PCR技術及其在臨床診斷應用中的進展
一、病原體的定性及定量檢測，PCR及其相關技術適用于病毒，細菌、寄生蟲等所有病原體的檢測，以下就SDA首批的四種病原體基因診斷項目加以說明。1. PCR技術在結核菌檢測中的應用及意義結核菌基因診斷的意義主要表現在：a. 區分TB與其它分枝桿菌；b. 檢測TB耐藥基因；c . 提高TB的陽性檢出率。2
PCR快速檢測技術及其在食品中的應用
[摘 要] 微生物食品安全是當前消費者與食品工業共同關注的話題,食品中致病菌的快速、準確、簡便檢測,對于食品安全質量控制以及食品鏈中致病性細菌的溯源追蹤具有重要作用。在選用微生物的快速檢測方法時，應該考慮到方法的預期目標的精確性、檢測時間、經濟性、可接受性、操作簡便性、技術服務等因素。介紹了P
多重PCR技術在多種病原體檢測應用中具有三大特點:
①高效性:同一PCR反應管中可同時檢測多個病原體基②系統性:對引起相同或類似癥狀疾病的不同病原微生物或具有相同感染途徑的多種病原體等進行檢測或鑒別。例如引起呼吸道疾病的病原體;通過血液傳播的感染性病原體;導致腦炎腦膜炎癥候群相關病原體等，都可使用多重PCR技術進行組合檢測與鑒別。③經濟性:相較于多個
多重分子檢測技術特點及其在病原體診斷中的應用
近年來分子檢測在病原學診斷上的發展非常迅速，特別是對病毒和非典型病原體的檢出效率和準確性大幅提升，成為臨床和實驗室共同關注的熱點。此次新冠疫情后，無論臨床還是實驗室都意識到分子檢測在病原學診斷中具有不可或缺的地位。感染性疾病是大家關注的公共衛生問題。在2016年世界衛生組織公布的數據，全球5690萬
PCR在臨床檢驗中的應用（三）
??? ?我國惡性腫瘤為人口死亡的第一位原因，其中以肺癌、胃癌及食管癌的發病率最高，占惡性腫瘤死亡總數的60％以上。引起腫瘤的原因非常復雜包括外界環境因素及遺傳背景。外界因此可分為三大類即化學、物理及生物因素。腫瘤與遺傳有關的證據越來越多，除已知的單基因遺傳腫瘤如視網膜細胞瘤、腎母細胞瘤等以外，
PCR技術應用三：突變基因檢測
? 基因突變(gene mutation)是遺傳病和腫瘤發生的根本原因，檢測與遺傳病及惡 性腫瘤發生有關的突變基因(mutant gene)是分子生物學，醫學遺傳學及腫瘤學研究 的熱點，它對闡明遺傳病和腫瘤發生的分子生物學基礎及其診斷和早期診斷具有重要 ＼意義，分子生物學技術的發展，尤其是PCR技
PCR技術應用三：突變基因檢測
基因突變(gene mutation)是遺傳病和腫瘤發生的根本原因，檢測與遺傳病及惡 性腫瘤發生有關的突變基因(mutant gene)是分子生物學，醫學遺傳學及腫瘤學研究 的熱點，它對闡明遺傳病和腫瘤發生的分子生物學基礎及其診斷和早期診斷具有重要 ＼意義，分子生物學技術的發展，尤其是PCR技術
熒光定量PCR儀技術及其在醫學中的應用
劉向國 謝國明 (重慶醫科大 重慶市 400016)摘 要 熒光定量PCR儀技術是一種新的核酸定量技術，該技木在PCR儀反應系統中引人了熒光標記探針，具有可實時監測，高靈敏性，高特異性和高精確性的特點，極大地克服了原有PCR儀技術的不足，擴大了PCR儀的應用范圍。關鍵詞 定量pcr；熒光；基因Flu
多重PCR技術原理
多重PCR技術具備單個反應體系檢測多種靶標的能力,但是如果需要鑒別反應體系中的不同靶標基因，則需要針對不同的靶標，設計特異性的探針并標記熒光基團，不同的靶標標記不同的熒光基團。為了避免熒光基團之間的相互干擾，應合理選擇不同光譜范圍的熒光基團。熒光基團應與使用的熒光定量PCR儀器具有適配性，每個熒光通
多重PCR核酸檢測
2020年3月11日，世衛組織總干事譚德賽在日內瓦召開的新聞發布會上宣布，新冠肺炎（COVID-19）疫情已經構成全球性大流行（pandemic）。截止到目前，中國的疫情在國內聯防聯控機制下已基本得到控制，而國外的情況卻不容樂觀。新冠肺炎疫情爆發于呼吸道疾病高發的季節，有各類呼吸道病原體單一感染或合
多重PCR在遺傳病診斷方面的應用抗性基因檢測
抗生素的廣泛使用導致具有耐藥性微生物的增多,比如耐甲氧西林金黃色葡萄球菌( ?methi-cillin resistant Staphylococcus aureus,MRSA)、萬古霉素抗性腸球菌( ?vancomycin resistant enterococcl)和多重耐藥結核分枝桿菌( mu
數字PCR在病毒臨床檢測中的應用
概述2015年剛成歷史，2016年已在眼前。就這樣，年復一年間滄海成桑田。生命科學領域，新方法層出不窮，老方法不斷升級，好不熱鬧。也如孔子的感嘆：逝者如斯夫，不舍晝夜。就拿PCR技術來說，熒光定量PCR作為一種進行基因表達分析的技術，截至目前最大的應用市場是病原微生物的核酸體外診斷。展望未來，作為q
熒光定量PCR儀技術及其在醫學中的應用（一）
?1 概述??????? 熒光定量多聚酶鏈式反應是一種新的核酸定量技術。該技術將熒光能量傳遞技術（fluorescence resonance energy transfer，FRET）應用于常規多聚酶鏈式反應（polymerase chain reaction，PCR儀中，從而進行定量檢測。FRE
熒光定量PCR儀技術及其在醫學中的應用（二）
3 在醫學中的應用3．1 病原體測定PCR技術的問世使病原體檢測能夠快速、方便地進行。由于PCR技術假陽性率太高，只要有微量病原體存在就可得到陽性結果，這并不能作為診斷依據， 只有當一定數量的病原體存在時才有臨床意義。因此，對模板準確定量顯得特別重要，應用熒光技術PCR儀就能夠快速、準確地得到結果。
PCR技術在突變基因檢測中的應用
基因突變(gene mutation)是遺傳病和腫瘤發生的根本原因，檢測與遺傳病及惡 性腫瘤發生有關的突變基因(mutant gene)是分子生物學，醫學遺傳學及腫瘤學研究 的熱點，它對闡明遺傳病和腫瘤發生的分子生物學基礎及其診斷和早期診斷具有重要 ＼意義，分子生物學技術的發展，尤其是PCR技術的出
多重PCR在遺傳病診斷方面的應用DMD和BMD的檢測
Duchenne型肌營養不良癥( Duchenne muscular dystrophy,DMI)是一種很常見的人類遺傳病,為X性染色體隱性遺傳性肌肉變性疾病,50%的病例由基因缺失引起,大約每3500個男嬰就有一個發病,1/3的病例由新的突變所致,肌營養不良基因長200kb,至少有70個外顯子,被
質譜技術及其在臨床檢驗中的應用
引言質譜(mass spectrometry,MS)技術是一種重要的檢測分析技術,通過將待測樣本轉換成高速運動的離子,根據不同的離子擁有不同的質荷比(m/z)進行分離和檢測目標離子或片段,然后依據保留時間和其豐度值進行定性和定量[ 1]。近年來,質譜技術發展迅速,通過改進離子源和分離器相
臨床檢驗技術發展及其在耐藥基因檢測中的應用進展
劉曉燕 (公安縣人民醫院檢驗科，湖北公安434300)王 紅 (湖北中醫藥大學醫學檢驗與技術學院，湖北武漢430065)[關鍵詞]?臨床檢驗技術；耐藥基因；分子生物學技術一份準確全面的醫學檢驗報告是醫生做出準確診斷與制定正確治療方案必不可少的依據。因此，臨床醫學檢驗是一門極其重要的醫學學科。筆者對臨
多重PCR法檢測STEC
產志賀毒素大腸桿菌（STEC）具有很強的致病性，全球范圍內由其引發的食物中毒和其他公共衛生事件呈逐年升高之勢，嚴重威脅人類的健康。開發快速可靠的檢測手段對其引發的食源性疾病的監測、控制和預防意義重大。本文結合對STEC分子生物學特征的研究，著重介紹了多重PCR檢測技術在檢測食品中STEC方面的
熒光定量PCR技術及其應用（一）
熒光定量PCR（也稱TaqMan PCR,以下簡稱FQ-PCR）是美國PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術，該技術是在常規PCR基礎上加入熒光標記探針來實現其定量功能的，與變通PCR相比，FQ-PCR具有許多優點。本文擬就該技術的特點、原理和方法以及應用作一簡
熒光定量PCR技術及其應用（二）
3 應用由于FQ-PCR具有高靈敏性，高特異性和高精確性的特點，目前，該項技術已被應用于病原體測定、腫瘤基因檢測、免疫分析、基因表達、突變及其多態性的研究等多個領域。3.1 病原體測定由于PCR技術的問世，使得病原體檢測能夠快速而方便的進行。但由于其高靈敏性，實驗操作很容易受到污染而出現假陽性。只要
熒光定量PCR技術及其應用（一）
熒光定量PCR（也稱TaqMan PCR,以下簡稱FQ-PCR）是美國PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術，該技術是在常規PCR基礎上加入熒光標記探針來實現其定量功能的，與變通PCR相比，FQ-PCR具有許多優點。本文擬就該技術的特點、原理和方法以及應用作一簡
多重PCR技術的應用一個反應中檢測多個病原體
? ? ?本次新冠疫情防控工作中，多次強調了呼吸道病原體鑒別檢測的重要性。近期，圣湘生物利用多重PCR技術開發的新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)、甲型流感病毒、乙型流感病毒多重核酸檢測試劑盒(熒光PCR法)已獲得歐盟認證機構頒發的CE認證證書。另外，還有六項呼吸道病原體核酸檢測試劑盒以及七項呼吸
上轉發光技術在食品病原微生物檢測中的應用
近年來，由食源性致病微生物引發的疫情不斷發生，食品安全已成為世界各國共同面臨和關注的問題，由病原微生物引起的食源性疾病是影響食品安全最主要的因素之一。快速而準確地檢測出被稱為“頭號殺手”的食品致病菌，是確保食品安全的首要任務，因此建立一種快速、準確、便捷的檢測技術，對于從源頭制止食源性致病菌污染，預
多重PCR在遺傳病診斷方面的應用用于遺傳病的檢測
用于其它遺傳病的檢測 Pici等人對囊性纖維化( cystic fibrosis,CF)基因突變進行了篩選研究,用4對外顯子引物進行多重PCR擴增,然后用限制性內切酶消化PCR產物,再進行垂直聚丙烯酰胺凝膠電泳,檢查15例發現有3例發生了基因突變。Pior等設計了8對引物同時檢測DMD/BMD
實時熒光PCR檢測技術及其優勢
眾所周知，PCR（聚合酶鏈反應）技術自從1985年問世以來，經過十幾年的發展，已成為實驗室的常規技術。它是現代分子生物學研究中不可缺少的手段，是一種極為敏感的放大系統。相比于傳統的臨床診斷方法，核酸診斷是分子水平上的診斷技術，可以彌補傳統臨床診斷方法的某些缺陷，比如，核酸診斷能直接揭示病原體的存在，
多重數字PCR技術介紹
什么是數字PCR？數字PCR是一種新的絕對定量PCR，通過對PCR反應物進行有限稀釋，隨后在不同的反應腔室里進行PCR擴增，最后根據泊松分布原理及陽性微滴的個數與比例得出靶分子的起始拷貝數或濃度的技術。什么是多重PCR？多重PCR又稱多重引物PCR或復合PCR，它是在同一PCR反應體系里加上兩對以上